Коллектив авторов из Онкологического исследовательского центра Фреда Хатчинсона и университета Вашингтона в Сиэтле (США) вот уже 10 лет работает над вопросом генной терапии HSV в нейронах. Изначально предполагалось использовать систему CRISPR/Cas9 для обнаружения и вырезания вирусной ДНК. Обнаружив крайне низкую эффективность данного подхода, исследователи решили для этих же целей использовать мегануклеазы - эндонуклеазы, характеризующиеся большим сайтом узнавания, что наделяет их очень высокой специфичностью. Для доставки мегануклеаз двух типов (5 и 8 тип совместно) к месту действия использовали модифицированный аденоассоциированный вирус (AAV). Кроме того, была испробована возможность доставки Cas9 посредством AAV. Данный эксперимент так же не удался, вероятно потому, что из-за своего большего размера Cas9 требует доставки одноцепочечными (ss) векторами AAV, в то время как мегануклеазы легко вписываются в более транскрипционно эффективные самокомплементарные (sc) AAV, которые не требуют de novo синтеза второй цепи или межмолекулярного отжига для экспрессии трансгена. Было показано, что отдельные серотипы AAV (1, 8 и Rh10 серотипы) различаются по своему тропизму для конкретных подмножеств нейронов, таким образом комбинация серотипов AAV может способствовать эффективной доставке мегануклеаз. Эксперименты in vivo на мышах продемонстрировали различную эффективность терапии HSV в верхних шейных (SCG) и тройничных ганглиях (TG) при разнообразных комбинациях доставки обеих мегануклеаз тремя серотипами AAV и их комбинациями (рис.1).

В результате данной методики удалось максимально достигнуть 92% эффективности удаления вирусной ДНК в верхних шейных ганглиях. Такие успехи позволяют надеяться на целесообразность применения технологии для лечения, в том числе, таких заболеваний как ВИЧ и гепатит В. Аналогичные исследования с оптимистичными результатами по этим заболеваниям уже ведутся.