Фаготерапия является перспективным методом лечения инфекций, вызванных устойчивыми к антибактериальным препаратам бактериями. Для получения безопасных терапевтических препаратов бактериофагов необходима глубокая очистка лизатов от компонентов бактериальной клетки, в частности эндотоксинов. Целью работы было исследовать применимость различных методов очистки фаголизатов для получения терапевтических препаратов. Фаги vB_KpnM_Seu621 (Myoviridae) и vB_KpnP_Dlv622 (Autographiviridae) использовали для получения лизата штамма Klebsiella pneumoniae KP9068. Очистку лизатов проводили методом осаждения бактериофагов с использованием полиэтиленгликоля, ультрацентрифугированием в градиенте CsCl, ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы, с помощью центрифужных концентраторов (100 кДа), концентрированием на целлюлозных фильтрах 0,22 мкм в присутствии MgSO4. Уровень эндотоксинов определяли ЛАЛ-тестированием. В результате действия vB_KpnM_Seu621 и vB_KpnP_ Dlv622 были получены лизаты с титром 1,25 × 1012 ± 7,46 × 1010 и 2,25 × 1012 ± 1,34 × 1011 БОЕ/мл и концентрацией эндотоксина 3806056 ± 429410 и 189456 ± 12406 ЕЭ/мл соответственно. Из традиционных методов оптимальным по снижению уровня эндотоксина и сохранению концентрации фаговых частиц было ультрацентрифугирование в градиенте CsCl (303 ± 20 – 313 ± 35 ЕЭ/мл, 1,5‒2,75 × 1012 ± 1,71 × 1011 БОЕ/мл); из альтернативных — очистка в градиенте сахарозы и фильтрация в присутствии MgSO4. Метод очистки лизатов следует подбирать для каждого препарата бактериофагов отдельно. Из способов очистки лизатов, пригодных для внутривенного и интратекального введения, перспективны метод ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы и фильтрация в присутствии MgSO4.
ПРОСМОТРЫ 31
Метилирование ДНК является наиболее распространенной эпигенетической модификацией, вызываемой ионизирующим излучением. При этом можно наблюдать как гиперметилирование, которое подавляет транскрипцию промоторных областей генов, так и гипометилирование, приводящее к активации генов. Оба указанных механизма могут принимать участие в канцерогенезе. Целью настоящего исследования было оценить статус метилирования СpGостровков промоторов генов защитных систем BCL-2, CDKN1A и ATM в клетках периферической крови у хронически облученных жителей прибрежных сел р. Течи (Челябинская область) в отдаленные сроки. Оценку метилирования промоторных регионов генов BCL-2, CDKN1A и ATM у 68 человек, проживающих в селах, расположенных по берегам р. Течи, проводили методом метилспецифичной ПЦР в реальном времени. В группу облученных лиц вошли 54 человека, у которых кумулятивные дозы красного костного мозга находились в диапазоне от 0,09 до 3,51 Гр. Группа сравнения состояла из 14 человек, проживающих в схожих социально-экономических условиях с накопленной дозой облучения красного костного мозга менее 70 мГр за весь период своей жизни. В результате проведенного пилотного исследования у облученных лиц в отдаленном периоде после хронического низкоинтенсивного радиационного воздействия не были выявлены значимые изменения в уровне метилирования CpG-островков промоторных регионов генов CDKN1A, BCL-2, ATM относительно группы сравнения, также не были отмечены изменения в дозовых подгруппах «от 87 до 994 мГр» и «более 1000 мГр».
ПРОСМОТРЫ 40
Одним из патогенов, характеризующихся критическим показателем доли штаммов с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), является Pseudomonas aeruginosa. В качестве альтернативы антибиотикам при терапии инфекций, вызванных штаммами с МЛУ, рассматривают фаготерапию. Целью исследования было выделить и охарактеризовать бактериофаг P. aeruginosa, потенциально пригодный для терапии инфекционных заболеваний. Выделение проводили методом накопительных культур. Спектр литической активности устанавливали спот-тестированием на коллекции из 40 штаммов P. aeruginosa. Полногеномное секвенирование выполняли на платформе MiSeq (Illumina). Филогенетический анализ геномов проводили с помощью VICTOR. Выделенные бактериофаги vB_PaeA-55-1w и vB_PaeM-198, принадлежащие к семействам Autographiviridae и Myoviridae соответственно, обладали широким спектром литической активности (около 50% каждый), в том числе вызывали лизис штаммов с МЛУ. Геномы vB_PaeA-55-1w и vB_PaeM-198 представлены двухцепочечной ДНК длиной 42,5 и 66,3 т.п.н. соответственно. В составе геномов аннотировано 52 (vB_PaeA-55-1w) и 95 (vB_PaeM-198) открытых рамок считывания, среди них гены интеграз и токсинов не обнаружены. На филогенетическом древе vB_PaeA-55-1w располагался в кластере совместно с бактериофагами рода Phikmvvirus семейства Autographiviridae, в том числе с используемыми в фаготерапии, а vB_ PaeM-198 входил в кластер, включающий бактериофаги рода Pbunavirus семейства Myoviridae. Бактериофаги vB_PaeA-55-1w и vB_PaeM-198 можно рассматривать в качестве кандидатов для применения в фаготерапии, в том числе и для лечения инфекций, вызванных штаммами P. aeruginosa с МЛУ.
ПРОСМОТРЫ 40
Проведенные в последние десятилетия многочисленные исследования позволили получить большой объем научной информации по проблемам, связанным со спорт-ассоциированными сотрясениями головного мозга. В обзоре сделан анализ мировых данных о сотрясении головного мозга при занятиях спортом детей и юных спортсменов. Обсуждены «болевые точки» проблемы, к которым авторы относят сложные и нерешенные вопросы по критериям диагностики, применению современных методов нейровизуализации и перспективных биомаркеров с учетом новых научных данных о патофизиологических механизмах сотрясений головного мозга. Большое внимание уделено описанию физиологических особенностей детей и подростков и предрасполагающих факторов, значимых как для диагностики, так и для тактики ведения при возникновении этого состояния. Сформулированы актуальные задачи, решение которых необходимо для совершенствования практики спортивной медицины при сотрясении головного мозга у спортсменов детско-юношеского возраста.
ПРОСМОТРЫ 41
Дыхательные мышцы (ДМ) — важнейшее звено респираторной системы, обеспечивающее легочную вентиляцию. Целью исследования было оценить силу инспираторных (MIP) и экспираторных (MEP) ДМ после COVID-19 и выявить взаимосвязь показателей MIP и MEP с функциональными показателями системы дыхания. Проанализированы данные 36 пациентов (72% мужчин; медиана возраста — 47 лет), которым проводили спирометрию и бодиплетизмографию, определяли диффузионную способность легких (DLCO) и измеряли MIP/MEP. Медиана срока проведения исследований от начала COVID-19 составила 142 дня. Пациенты были разделены на две подгруппы. Медиана максимального объема поражения легочной ткани в острый период заболевания по КТ в  подгруппе 1 составила 27%, в подгруппе 2 — 76%. Наиболее частым функциональным нарушением было снижение DLCO (выявлено у 20 (55%) пациентов). Снижение MIP и MEP было отмечено у 5 и  11 пациентов соответственно. Статистически значимых различий по показателям MIP и MEP между подгруппами выявлено не было, однако частота снижения MIP во второй подгруппе была выше (18%). Статистически значимых связей показателей MIP и MEP с параметрами вентиляции и легочного газообмена выявлено не было. Таким образом, у пациентов, перенесших COVID-19, обнаружено снижение MIP и MEP в 14 и 31% случаев соответственно. Исследование силы ДМ целесообразно включать в план обследования пациентов, перенесших COVID-19, для выявления их дисфункции и проведения медицинской реабилитации.
ПРОСМОТРЫ 55
Плазматическая мембрана является одной из главных мишеней действия катионных антисептиков (КА). Целью исследования было изучить на молекулярном уровне действие относящихся к разным химическим классам КА на кардиолипинсодержащие участки плазматической бактериальной мембраны. Исследование выполнено с применением крупнозернистого молекулярного моделирования. На основе созданных крупнозернистых молекулярных моделей КА, включая мирамистин, хлоргексидин, пиклоксидин и октенидин, изучено их взаимодействие с липидным кардиолипинсодержащим бислоем. КА снижали коэффициенты латеральной диффузии липидов и увеличивали площадь поверхности мембраны, приходящуюся на липид. Кроме мирамистина, все КА снижали параметры порядка жирнокислотных цепей липидов. Добавление октенидина в соотношении КА : липид как 1 : 4 приводило к кластеризации кардиолипина с последующим вырыванием из модельного бислоя нейтральных молекул фосфатилилэтаноламина. Выявлено, что КА обладают способностью сорбироваться на липидном бислое, вызывая кластеризацию отрицательно заряженных липидов. Антисептик октенидин вызывает образование кардиолипиновых микродоменов. Нарушение латерального распределения липидов и вырывание молекул фосфатидилэтаноламина может привести к повышению проницаемости липидного бислоя. Наиболее значимое уменьшение коэффициента латеральной диффузии липида кардиолипина в 2,8 ± 0,4 раза отмечено в присутствии КА хлоргексидина при соотношении антисептик : липид как 1 : 4.
ПРОСМОТРЫ 69
У жителей прибрежных сел реки Течи, подвергавшихся хроническому радиационному воздействию, отмечают изменения клеточного состава периферической крови в отдаленном периоде, что может быть следствием структурных и функциональных нарушений в пуле гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и клеток-предшественников. Целью работы было оценить количественные характеристики пула CD34+-клеток периферической крови у хронически облученных лиц в отдаленном периоде. Через 60 лет после начала облучения обследовано 153 человека, которых разделили на четыре группы: лиц, облученных в период внутриутробного и постнатального развития (средняя поглощенная постнатальная доза составила 570 мГр); лиц, облученных только постнатально (средняя поглощенная постнатальная доза составила 790 мГр), а также две группы сравнения, в которых поглощенные постнатальные дозы облучения красного костного мозга (ККМ) не превышали 70 мГр. Оценку абсолютного и относительного количества CD34+-клеток в периферической крови у хронически облученных лиц проводили методом проточной цитометрии. В группе лиц, облученных в период внутриутробного и постнатального развития, не выявлено изменение количества CD34+-клеток относительно группы сравнения, возрастная зависимость также не зарегистрирована. При этом отмечено значимое снижение абсолютного количества ГСК и клеток-предшественников с увеличением дозы облучения ККМ. В группе лиц, облученных только постнатально, обнаружено значимое увеличение показателей CD34+-клеток периферической крови относительно группы сравнения (для абсолютного количества p = 0,004; для относительного — p = 0,009), отмечено дозозависимое увеличение ГСК и клеток-предшественников в периферической крови (для абсолютного количества p = 0,02; для относительного — p = 0,03), при этом зарегистрировано снижение данного типа клеток с возрастом (для абсолютного количества р = 0,02, для относительного — p = 0,04).
ПРОСМОТРЫ 74
В Приморском крае, где вопросы обращения с радиоактивными отходами (РАО) стоят весьма остро, ведется строительство Регионального центра кондиционирования и долговременного хранения радиоактивных отходов (РЦКДХ). Проект предполагает интенсификацию работ по обращению с РАО, а также строительство нового технологического корпуса по переработке РАО, пункта хранения и котельной. Целью исследования было дать комплексную гигиеническую оценку территорий в районе расположения РЦКДХ перед вводом его в эксплуатацию. Оценку радиационных параметров выполняли с использованием методов радиометрии и спектрометрии, содержания тяжелых металлов — методом атомно-абсорбционной спектрометрии. В почвах и грунтах выявлено присутствие тяжелых металлов (свинец, никель, медь и др.) и мышьяка в концентрациях, превышающих фоновые значения и в ряде случаев предельно допустимую концентрацию (ПДК). Радиационную обстановку характеризуют фоновые значения активности техногенных радионуклидов 137Cs и 90Sr в объектах окружающей среды. Качество воды колодцев и скважин в основном соответствует требованиям для подземных вод, используемых для нецентрализованного водоснабжения, за исключением скважин, где присутствует мышьяк в концентрации выше ПДК. Среднегодовая интегральная доза облучения населения за вычетом естественного регионального фона составила 0,046 мЗв, что ниже предела дозы. Канцерогенный риск для здоровья населения от воздействия радиационного и химического фактора составил 4×10–6 и 6×10–6 соответственно. Полученные результаты являются основой для установления референсных значений состояния загрязнения окружающей среды перед вводом в эксплуатацию РЦКДХ и могут быть использованы в практике регулирующего надзора в процессе его эксплуатации.
ПРОСМОТРЫ 102