ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Методика оценки влияния растворов биологически активных веществ на коагуляцию
1 Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины имени Ю. М. Лопухина Федерального медико-биологического агентства, Москва, Россия
2 Московский физико-технический институт (национальный исследовательский университет), г. Долгопрудный, Московская обл., Россия
Для корреспонденции: Валентин Александрович Манувера
ул. Малая Пироговская, д. 1А, г. Москва, 119435, Россия; ur.xednay@arevunamv
Финансирование: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23-25-00006, https://rscf.ru/project/23-25-00006/.
Вклад авторов: В. А. Манувера — концептуализация, эксперименты, написание текста; К. А. Бровина — эксперименты, редактирование текста; П. А. Бобровский — анализ данных, визуализация, редактирование текста; Е. Н. Графская — эксперименты, редактирование текста; Д. Д. Харлампиева — эксперименты, редактирование текста; В. Н. Лазарев — руководство научной группой, редактирование текста.
Поиск новых антикоагулянтов требует простых и недорогих методов первичного определения их активности. Для лабораторной оценки состояния системы гемостаза широко используют клоттинговые тесты, т. е. модельные исследования, оценивающие с клинической точки зрения состояние системы гемостаза по скорости образования фибринового сгустка. Реактивы и приборы для их выполнения производят в России, они имеют низкую себестоимость и просты в применении, однако для исследования активности антикоагулянтов в методики измерения необходимо внести некоторые изменения. Целью работы было показать работоспособность протокола тестирования антикоагуляционной активности растворов с помощью модифицированных стандартных клинических тестов на измерение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), протромбинового времени (ПВ) и тромбинового времени (ТВ). Использовали реактивы для измерения АЧТВ, ТВ и ПВ, а также гепарин отечественного производства и два рекомбинантных белка-антикоагулянта медицинской пиявки, полученные в нашей лаборатории. Проводили клоттинговые тесты с добавлением в реакционную смесь антикоагулянтов, определяли работоспособность и границы применимости использованных методов. При исследовании гирудина, гепарина и цистеин-богатого антикоагулянта медицинской пиявки с помощью измерения АЧТВ, ТВ и ПВ продемонстрировано дозо-зависимое увеличение времени образования сгустков. Определена совместимость методов с использованием некоторых распространенных компонентов буферных растворов, используемых в биохимических исследованиях. Показано, что после небольших модификаций стандартных клоттинговых методов определения параметров гемостаза можно использовать их для тестирования растворов новых потенциальных антикоагулянтов.
Ключевые слова: протромбиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время, тромбиновое время, антикоагулянт, пиявка